VB12 檢測方法主要有液相色譜法、液 質(zhì)聯(lián)用法、酶聯(lián)免疫法、原子吸收光譜法、化學(xué)發(fā)光分析法、微生物法等。 微生物法是經(jīng)典的 VB12 測定方法,利用萊式曼 氏乳桿菌對(duì) VB12 的特異性,可靈敏地檢測出基 質(zhì)中 VB12,微生物法具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、 檢出限低、不易漏檢的特點(diǎn)。超凈工作臺(tái):HCB-1300V 型,海爾生物醫(yī) 療有限公司;分析天平:AL-204 型,賽多利 斯科學(xué)儀器有限公司;生化培養(yǎng)箱:LRH-250F型,上海一恒科學(xué)儀器有限公司;立式壓力蒸汽 滅菌鍋:YXQ-LS-50S II 型,上海博迅醫(yī)療生物 儀器股份有限公司;紫外分光光度計(jì):UV-1800 型,日本島津;離心機(jī):LD5-2B 型,廣州市丹 安儀器儀表有限公司;pH 計(jì):PHS-3C,上海精 科儀器有限公司。
采取的是進(jìn)口 美國菌株,較之前國產(chǎn)菌株活性及穩(wěn)定性、純度 更好。標(biāo)準(zhǔn)菌株萊式曼氏乳桿菌的活性和濃度是 影響微生物法檢測 VB12 成功的基礎(chǔ)和前提,萊 式曼氏乳桿菌為厭氧菌,在試驗(yàn)用菌的傳代培養(yǎng) 過程中,要嚴(yán)格執(zhí)行厭氧條件,并控制好傳代次 數(shù);標(biāo)準(zhǔn)系列及樣品液的培養(yǎng)時(shí)間、pH、培養(yǎng)溫 度會(huì)影響萊式曼氏乳桿菌的生長繁殖,也需要嚴(yán) 格控制這些生長條件。之前一直用國外 BD 培養(yǎng)基,成本比較高,目前國產(chǎn)培養(yǎng)基也能夠達(dá) 到良好的試驗(yàn)結(jié)果,且成本相對(duì)較低。