探討干擾和過表達(dá) DCN 基因?qū)ωi卵泡顆粒細(xì) 胞的表型和功能的影響，以及其對TGF－β通路下游相 關(guān)基因和凋亡基因的表達(dá)調(diào)控，為解析豬卵泡發(fā)育和 排卵數(shù)量控制機理提供新的依據(jù)。超凈工作臺，購自上海博迅醫(yī)療設(shè)備廠; 臺式高 速離心機、酶標(biāo)儀，均購自美國 Thermo 公司; 核酸蛋 白檢測儀、水平電泳槽電泳儀、Vniversal Hood Ⅱ凝膠 成像系統(tǒng)，均購自美國 Bio－Ｒad 公司; 電熱恒溫培養(yǎng) 箱、超恒溫水浴鍋，均購自上海精宏實驗設(shè)備有限公 司; 電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，購自寧波東南儀器有限公 司; 熒光定量 PCＲ 儀，購自上海羅氏制藥有限公司; 流式細(xì)胞儀，購自美國 BD 公司。

    將采集的母豬卵巢放于 35 ～ 37 ℃含 5%青霉素、 鏈霉 素 混 合 液 ( 青 霉 素 10 000 IU /mL，鏈 霉 素 10 000 μg /mL) 的生理鹽水中，1 h 內(nèi)帶回實驗室。 再用含 5%青霉素、鏈霉素混合液的滅菌 PBS 將卵巢 中殘留的血液和雜質(zhì)沖洗干凈，選取直徑 1 ～ 5 mm 的 卵巢放入盛有 DMEM 培養(yǎng)基的 6 cm 培養(yǎng)皿中，用手 術(shù)刀片刺破并刮出卵泡液( 避開血管) ，使得卵泡液 充分流入到 DMEM 培養(yǎng)基中; 用 200 目不銹鋼細(xì)胞 篩過濾后1 000 r /min離心 5 min，用含 10% FBS 的 DMEM 培養(yǎng)基重懸卵泡顆粒細(xì)胞并計數(shù)，與陰性對照組和空白對照組相比， 干擾質(zhì)粒 pSIＲEN－DCN01 使細(xì)胞的增殖有所上升但 并不顯著( P＞ 0. 05) ，表明下調(diào) DCN 基因表達(dá)后，顆 粒細(xì)胞的增殖能力增強; 過表達(dá)質(zhì)粒 pcDNA3. 1( +) － DCN 使細(xì)胞的增殖極顯著下降( P＜0. 01) ，表明過表 達(dá) DCN 基因后，顆粒細(xì)胞的增殖能力下降，將會影響 顆粒細(xì)胞的生長。